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广西DNA亲子鉴定中心PCR技术的原理

来源： 柳州中正亲子鉴定中心 日期：2013-09-06 点击： 311 属于： 鉴定知识

广西亲子鉴定中心采用的PCR技术实际上是模拟生物体内的在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的体外DNA酶促合成反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性，引物是PCR反应中最主要的成分。反应分三步：(1)变性(denaturation)：首先是双链DNA分子在95℃左右高温下加热，DNA双螺旋配对碱基间的氢键断裂，双链解离成单链DNA; (2)退火(annealing)：降低温度使引物和其互补的模板形成杂交链。由于模板分子结构较引物要复杂的多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板DNA，模板DNA双链之间互补的机会较少；(3)延伸(extension)：在广西亲子鉴定中心DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷酸底物及M矿+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的5’一3’方向的DNA链延伸反应。
经过高温变性，低温退火和中温延伸3个温度的循环，模板上介于两个引物之间的序列不断得到扩增。每循环一次，目的DNA的拷贝数加倍，随着循环次数的增加，目的DNA以指数的形式堆积，数量可达2×105-7拷贝。在反应的最初阶段，原来的DNA担负着起始模板的作用，随着循环次数的递增，由引物引导延伸的片段急剧地增多而成为主要模板。因此，绝大多数扩增产物将受到所加引物5’末端的限制，最终扩增产物是介于两种引物5’端之间的DNA片段。

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