河池亲子鉴定寡核苷酸生物素标记和荧光标记的制备

 河池亲子鉴定合成末端生物素寡核苷酸和荧光标记的5’末端带氨基(C6氨基接头，Glen Research)的寡核苷酸衍生物。
      河池亲子鉴定捕捉探针的点样
      (l)将25个检测位点的微电子芯片置于电控工作站或STAR仪器系统；
      (2)芯片用20出的中性组氨酸缓冲液(50mmol/L，pH7 .4)洗3次；
      (3)在中性组氨酸缓冲液(50mmol/L，pH7 .4)中，将20yl 50nmol/L生物素标记的荧光对照探针定位于芯片上；
      (4)两个检测位点导入200na/pad正偏压Imin，四角的控制电极为负偏压；
      (5)阵列用20pl中性组氨酸缓冲液(50mmol/L，pH7 .4)洗5次；
      (6)荧光下观察(594nm激发波长，630nm发射波长)l，l和5.5位点，将发现强荧光信号，而未杂交位点仍为暗色（没有荧光信号），接着生物素标记探针以连续（每个位点定位不同的探针序列）或平行方式（多个位点定位同一探针序列）进行定位。在中性组氨酸缓冲液中(50mmol/L，pH7 .4)，将20YI 50nmol/L第一种生物素标记的寡核苷酸溶液加入到芯片上，然后在第一个待检位点处导入200nA/pad正偏压Imin，四角的控制电极为负偏压。将第一个捕获探针定位到该处。若要定位到多个检测位点上，电流强度(nA)也相应增大。此后，芯片再用中性组氨酸(50mmol/L，pH7 .4)洗5次。
      (7)重复上述过程，直至所有要求的捕获探针序列都被定位到它们相应的待测位点处。最后阵列用组氨酸缓冲液( 50mmol/L，pH7 .4)洗5次，准备杂交。