柳州亲子鉴定实验室使用ABI遗传分析仪仪器和原理

 ABI公司已推出的两种型号（373A和377A）自动DNA序列仪的主机是一台带有自动检测系统的高压电泳装置。在柳州亲子鉴定系统中，不同ddNTP终止的DNA片段由于标记了不同的荧光发色基团，它们可以混合起来样在同一样品孔中。两极间极高的电势差推动着DNA片段在凝胶中泳动并达到相互分离，并依次穿过设置在靠近胶板下端的固定检测区域。窗口处激光束光学路线分布以及荧光信号收集检测系统的示意图。由激光器发出的极细光束，通过精密的光学系统被导向凝胶表面的检测区，在这里激光束以与胶板垂直的角度和穿过“窗口”的DNA片段相遇；DNA片段上的荧光发色基团吸收了激光束提供的能量而发出特征波长的荧光。这种荧光又经过聚合后传给一个高灵敏度光电管而转化为电信号，4种不同波长的荧光由安放在光电管前方的旋转滤光片加以区分。DNA片段电泳与检测是一个动态过程，DNA片段通过窗口时信号被自动记录，继续向胶板底部泳动，最后进入下层缓冲液中，这就是自动测序系统中广泛采用的真实时间扫描技术( real time scannin8)。实验者所感兴趣的是那些DNA片段在到达距加样孔25cm处的“窗口”检测区时，大小仅相差一个碱基的DNA片段间有足够的分离。一个DNA片段经过“窗口”时，它的特征荧光波长和强度被及时记录下来，随后进入窗口位置的是长一个碱基的片段。这就是说，DNA序列的读解是通过记录经过窗口区域的DNA片段的特征波长及顺序来实现的，测序与电泳步骤同步完成。   
      柳州亲子鉴定单道电泳测序( one lane sequencing)是ABI公司自动测序装置上的又一改进。在放射性自显影测序工作中，碱基顺序的确定需要实验人员细心地比较4条电泳道上显色条带的分布。有时因温度梯度或凝胶不均匀使胶板上不同区域DNA片段泳动不均匀，都将给解读工作带来很大困难。采用单道电泳技术，所有的DNA片段由一条电泳道依次达到检测窗口，便消除了上述因素造成的影响。即使因边缘效应等问题造成DNA条带倾斜，也不会影响信号的判读。