柳州亲子鉴定中心对扩增交叉污染的几种处理方法

柳州亲子鉴定处理方法1．环境污染
    (l)稀酸处理法：对擦拭试验阳性部位或器件可用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残存DNA脱嘌呤。
    (2)紫外线照射法：uv波长一般选择254—300nm，照射30min即可。需注意的是，选择UV来消除PCR产物残留污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布。UV只对500bp以上长片段有效，uv照射时，PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体，形成二聚体的程度取决于uv波长，这些二聚体可终止延伸。
    柳州亲子鉴定处理方法2．反应液污染的处理
    反应液污染时，可采用下列方法之一处理：
    (l) DNase I法：在不加模板和Taq聚合酶的PCR混合液中加0.5u DNase I，室温反应30min后，加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶，进行正常PCR。
    (2)内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如Msp I等），进行同DNase I法反应处理，作用时间延长至th。最好几种酶联合使用，可克服用一种酶识别序列特异的缺陷。
    (3) UV照射法：反应液中不加模板与Taq DNA聚合酶，注意事项与方法同上述uv照射法。
    (4)7线辐射法：7线辐射能通过水的离子化产生自由基破坏DNA。1.5kCy的辐射可完全破坏O.lng基因组DNA，2.OkGy可破坏104拷贝的质粒分子；4.OkGy的辐射不影响PCR，但高于此限时会使PCR效率下降。引物受照射而不影响PCR。
    柳州亲子鉴定处理3．尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)法
    (l)原理：这种方法利用UDG可裂解单或双链DNA中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖苷键，使含dU的PCR产物降解，阻止Taq DNA聚合酶的延伸，但UDG对不含dU的模板无任何影响。在PCR产物或引物中用dU代dT，这种dU化的PCR产物与UDG一起孵育后使其失去再被扩增的能力。UDG对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。
    (2) dUTP法：用dUTP代替PCR中的drITP，使产物中掺人大量dU。在PCR正常循环前，用UDC在50—55℃处理PCR混合液可以消除PCR产物的残留污染，在正常PCR循环前进行95℃处理5min灭活UDG，含dU的新PCR产物不会受到影响。
    (3) dU引物法：合成引物时以dU代dT，PCR产物5’端带dU。UDC处理后，引物失去了结合位点而不能扩增。对1 - 2kb以上的长片段扩增，用dUrIP法的扩增效率比用dTI'P的低，dU引物则没有这一现象。dU引物最好将dU设计在3’端或近3’端。
    UDG法的优点：①去除任何来源的污染；②UDG处理与PCR扩增可在同一试管内进行；③污染消除彻底。