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广西亲子鉴定PCR的温度循环参数

来源： 柳州中正亲子鉴定中心 日期：2013-09-09 点击： 188 属于： 鉴定知识

广西亲子鉴定PCR的变性这一步很重要。此步若不能使靶基因模板和（或）PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。DNA在其链分离温度(strand separation temperature，Tss)时变性只需几秒钟，但反应管内部达到Tss还需一定时间。典型的变性条件是95℃30s，或97 0C 158，更高的温度可能更有效，尤其是对富含G+C的靶基因。但变性温度太高会影响酶活性。广西亲子鉴定最简单有效的方法是在加Taq聚合酶前先使模板在95℃变性7一lOmin，在以后的循环中，将模板DNA在94℃或95℃变性Imin。在扩增短片段(100—300bp)时，可用简便、快速的两步PCR法，同时在5- 10个循环后，将变性温度降至87。90℃可改善PCR产量，具体降低程度则根据具体反应和使用的PCR仪而定。

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