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广西亲子鉴定中心Chelex-OO结合硅藻提取方法

来源： 柳州中正亲子鉴定中心 日期：2013-08-24 点击： 164 属于： 鉴定知识

硅藻对DNA具有较好的吸附力，Chelex-100提取物经过硅凝纯化，可除去许多PCR抑制剂和短的DNA片段，有效地提高扩增成功率。50Vl Chelex-100攫取掖或PK裂解液．加900pl U裂解液(40mmoj/L Tria - Ha，pH6.4, 17.5mmol/L EDTA，1%TrIonX-100．40mmoVL琉氰酸．lOOmmol/L NaCI)．60%乙醇洗一次，然后用2ml80qa丙酮洗。将小柱转移到1.5ml离心管中，l 200r/min离心201以去除乙醇，室沮下放置lOmin，除净乙醇。在小柱中加50I蒸馏水，并将小柱转移到另一千净离心管中．室温放置5 min以释放I)NA．12 000r/min离心20s，收集流出的DNA溶陵，溶液可以j￡接用于PCR反应或4℃保存。
硅藻的提取宰较低，1 1111112血痕用Chelex - lOO提取可得到250nS DNA．用Pk -硅藻和Chalex -Joo 硅赣提取则为15ng.因为硅藻对棱苷暖和寡核苷敢结合力低，使总产量低。但硅藻能有效地除去PCR抑制刺，扩增重复性好。

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