上户口亲子鉴定测序胶的制备

广西上户口亲子鉴定测序胶的制备（以下步骤均以ABD XL377DNA自动测序仪为例）

      自动测序的优点之一是荧光发色基团吸收了激光束提供的能量而发射光信号，信号被探测器检测并传送至计算机，经整理显示出四种彩色图像。其缺点是凝胶本身及胶板上的任何污染物所放射出的荧光均会被当作信号收集。所以，在序列胶制备的过程中，很关键的是要消除一切可能产生荧光的物质。

      (1)胶板的清洗和组装

      洗制胶玻璃板时可用塑料刷（公司专门配备）或松软的海绵沾少量洗涤剂擦洗，用水反复多次冲洗，以除去残留的洗涤剂，再用蒸馏水冲洗干净，空气中晾干，晾干后玻璃板灌胶面肉眼应看不到任何痕迹。用0.4mm的夹条(spacer)装配好玻璃板。两边用夹子对称夹好，调整制胶玻璃板水平后，即可灌胶。

      (2)6%聚丙烯酰胺一尿素胶的配制

      核苷酸序列的数量和质量都取决于聚丙烯酰胺的质量，而聚丙烯酰胺浓度则取决于待分析DNA片段的长短。6%聚丙烯酰胺胶可读出距离引物5’端25 - 400bp，如果要读出距引物5’端更远的序列，可选用4%。5%的聚丙烯酰胺来测定。

      ①试剂

      10×TBE: 194g Tns (0.8mol/L),999硼酸(0.8mol/L),7.44g EDTA (O.01mol/L)，加去离子水至200ml

      40%聚丙烯酰胺：190g丙烯酰胺（测序级），lOg N，N’一甲叉丙烯酰胺，加去离子水500ml，搅拌20min，加一汤匙MB -树脂（可以不加），磁力搅拌30min，过滤，装入棕色瓶内，置4℃保存。也可用商品化的50% Loryl; Ranger胶溶液，直接使用。

      10%过硫酸铵(w/v)：l.og过硫酸铵加超纯水lOml，溶解后置4℃。

      TEMED

      尿素

      ②含6mol/L尿素的6%聚丙烯酰胺凝胶配制(30rnl)

      称取10.8g尿素，加15ml超纯水，稍加热，完全溶解。加3ml 10 x TBE，3.6ml 50%Long Ranger胶溶液，混匀，用0.45ym孔径的过滤器过滤，去除杂质。再加入150Vl lOqo过硫酸铵，15Vl TEMED。混匀。

      用50ml注射器吸人胶液，从玻璃板一侧将之灌注到两玻璃板之间的孔隙中。连续缓慢灌注，避免出现气泡。待胶液注满玻璃板后，胶板的上方插入鲨鱼齿梳子，平端靠胶液。室温下放置1—2h，固化聚合。灌注胶也可用平推法，详见STR章节。

      广西上户口亲子鉴定温馨提醒制备凝胶板时应注意：(1)在配制胶液和制胶时，要带手套。因为丙烯酰胺有强烈神经毒素，经皮肤吸收。在称取粉末时，要注意防止从呼吸道吸入。(2)如果用乙醇擦洗玻璃板时，一定要等乙醇挥发尽，才可制胶。(3)灌胶用的注射器，每次用后，用热水冲洗，再用蒸馏水冲净，以舫堵住。